Érika Carvalho Silva
Disciplina: Termogênese nos seres vivos
Professora: Ana Maria Landeira
Estudo do papel da proteína CIDEA nocontrole do estresse oxidativo celular
Família Cide
(Liang et al., 2003)
(Cory, 1998)
Cidea e Cideb como indutoras de apoptose
(Inohara et al., 1998)
Cide3 como indutora de apoptose
(Liang et al., 2003)
293T controle
293T CIDEB
293T CIDE3
Expressão das proteínas Cide em humanos
(Inohara et al., 1998)
(Liang et al., 2003)
Camundongos knockout
CIDEA e UCP1
AMPK e suas vias de sinalização
AMPK e Cidea
Modelo proposto
MOM
MIM
CadeiaTransportadorade Elétrons
F0
F1
ADP
ATP
H+
H+
H+
UCP
H+
H+
H+
Cidea
Knockout
MOM
MIM
CadeiaTransportadorade Elétrons
F0
F1
ADP
ATP
H+
H+
H+
UCP
H+
H+
H+
MOM
MIM
CadeiaTransportadorade Elétrons
F0
F1
ADP
ATP
H+
H+
H+
UCP
H+
H+
H+
Knockout
Cidea
Superexpressão
MOM
MIM
CadeiaTransportadorade Elétrons
F0
F1
ADP
ATP
H+
H+
H+
UCP
H+
H+
H+
Cidea
Cidea
Cidea
MOM
MIM
CadeiaTransportadorade Elétrons
F0
F1
ADP
ATP
H+
H+
H+
UCP
H+
H+
H+
Cidea
Cidea
X
Superexpressão
Cidea
MOM
MIM
CadeiaTransportadorade Elétrons
F0
F1
ADP
ATP
H+
H+
H+
UCP
H+
H+
H+
Cidea
Cidea
X
H+
H+
H+
H+
H+
H+
H+
H+
Superexpressão
Cidea
MOM
MIM
CadeiaTransportadorade Elétrons
F0
F1
ADP
ATP
H+
H+
H+
UCP
H+
H+
H+
Cidea
Cidea
X
H+
H+
H+
H+
H+
H+
H+
H+
ROS
Superexpressão
Cidea
MOM
MIM
CadeiaTransportadorade Elétrons
F0
F1
ADP
ATP
H+
H+
H+
UCP
H+
H+
H+
Cidea
Cidea
X
H+
H+
H+
H+
H+
H+
H+
H+
ROS
Superexpressão
Morte celular!!!
Objetivo
Caracterizar o papel da proteína Cidea nocontrole do estresse oxidativo
1) Estabelecimento do modelo
Linhagem Jurkat de célula T e células primárias
•Western blot para Cidea e UCP2
2) Colocalização e inibição de UCP2 por Cidea
•Microscopia confocal
•Imunoprecipitação de proteínas
•FACS para DiOC6
3) Efeito do estresse oxidativo: tratamento com H2O2
•Célula Cidea-KO é mais resistente ao tratamento com peróxido de hidrogênio?
•Célula UCP2-KO produz mais espécies reativas de oxigênio?
•Após o tratamento com peróxido de hidrogênio, ocorre diminuição da interação entre Cidea eUCP2?
•Doses celulares letais de peróxido de hidrogênio associado a tratamento com FCCP em Cidea-KO inibe essa morte?
AMPK na proteção celular do estresse oxidativo
AMPK na proteção celular do estresse oxidativo
4) Papel de Cidea na regulação de AMPK e outras vias metabólicas
•Ocorre fosforilação de AMPK após tratamento com peróxido?
•Cidea é capaz de ubiquitinar AMPK e levá-la para a degradação?
•Não degradação de AMPK necessária para sobrevivência após tratamento com peróxido?
•O que ocorre com enzimas da via glicolítica?
5) Cidea como sensor redox?
•Modelagem molecular e localização das cisteínas.
•Mutagênese sítio-dirigida das cisteínas para avaliar capacidade de responder ao estresseoxidativo.
Aceito para The Journal of Biologial Chemistry
Outra proposta!
Será um inibidor das proteínas CIDE um futuromedicamento anti-obesidade???
